Til innholdet

Prosjektnummer

910873

Prosjektinformasjon

Prosjektnummer: 910873
Status: Pågår
Startdato: 01.09.2026
Sluttdato: 01.09.2030

Candidatus Branchiomonas cysticola i gjellesykdom hos oppdrettet atlantisk laks (BranchInfect)

Betaproteobakterien Candidatus Branchiomonas cysticola (CBC) er det vanligste epiteliocyste-dannende agenset hos oppdrettslaks i Norge og Irland, og forekommer både i ferskvann og sjøvann. CBC kan infisere gjellevev uten å danne de karakteristiske intracellulære cystene, og det er foreslått at ekstracystiske bakterier i større grad kan stimulere immunrespons og føre til gjellepatologi. Histologiske lesjoner assosiert med CBC‑infeksjon hos fisk fra lokaliteter med gjellesykdom inkluderer lamellær epitelhyperplasi, subepitelial betennelse, pustler og nekrose. I tillegg er subepitelial nøytrofil betennelse, antatt å være assosiert med CBC‑infeksjon, de senere årene observert på flere ferskvanns- og sjøvannslokaliteter i Norge. Likevel har man i flere kohortstudier ikke klart å påvise en sammenheng mellom mengden CBC målt med RT‑qPCR og alvorlighetsgrad av mikroskopiske gjellelesjoner eller gjellescore. Den utbredte forekomsten av CBC hos tilsynelatende frisk laks indikerer at predisponerende faktorer kan være nødvendige for at agenset skal forårsake gjellesykdom, og/eller at det finnes variasjon i virulens og patogenitet innen arten. Stressende hendelser som termisk avlusing og notvask kan føre til økte mengder CBC i gjellene og økt forekomst av epiteliocyster i vevssnitt. Injeksjon av hydrokortison var nødvendig for å fremkalle sykdom forårsaket av laksepoxvirus (SGPV) og gjellepatologi hos naive laks eksponert for døde SGPV‑infiserte fisk i et smitteforsøk. Stress og redusert immunrespons kan være en sannsynlig forklaring på hvorfor enkelte fisk grupper utvikler sykdom etter CBC-smitte, mens andre ikke gjør det. Gjellesykdom hos laks i sjø er oftest multifaktoriell, og det er utfordrende å forstå rollen til et enkelt infeksiøst agens i felt der mange faktorer ikke kan kontrolleres. Dette kan også forklare manglende sammenheng mellom gjellepatologi og CBC‑mengde i kohortstudiene nevnt over. For å bevise at en bakterie er årsak til sykdom, anses eksperimentelle studier med randomiserte kontrollerte forsøk som gullstandarden. Hills kriterier for kausalitet i observasjonsstudier fremhever styrken av assosiasjon, temporalitet, konsistens, spesifisitet, biologisk gradient (dose‑respons) samt eksperimentelle bevis som viktige kriterier. For å forstå om CBC forårsaker gjellesykdom, under hvilke forhold sykdom oppstår, hvordan sykdommen utvikler seg og hvilke immunresponser som utløses, er det derfor ideelt å starte med et kontrollert smitteforsøk og utvikle en infeksjonsmodell som man så kan bygge videre på.

Dette prosjektet vil forsøke å isolere, berike og dyrke CBC, som grunnlag for å etablere en laboratoriebasert infeksjonsmodell. I tillegg vil gjellevev samlet inn fra tidligere kohortstudier gjenbrukes for å øke forståelsen av Ca. B. cysticola under feltforhold, og undersøke om det er samsvar mellom immun- og vevsresponser i laboratoriestudien og feltmateriale.
Hovedmål
Å forstå smitteveier, patogenese, potensialet for sykdomsutvikling og immunresponsene som utløses ved infeksjon med Ca. B. cysticola hos atlantisk laks. 

Delmål
  • Å utvikle og validere dyrkingsmetoder for isolering og stabil ren kultur av Ca. B. cysticola (AP1).
  • Å etablere én eller flere infeksjonsmodeller der atlantisk laks eksponeres for Ca. B. cysticola, og dermed undersøke om Kochs postulater kan oppfylles (AP2 og AP3).
  • Å beskrive og karakterisere eventuelle vevslesjoner forårsaket av Ca. B. cysticola-infeksjon i gjellene hos immunkompetent og immunsupprimert atlantisk laks (AP3).
  • Å undersøke om stress indusert ved hydrokortison-injeksjon før infeksjon påvirker utfallet av infeksjon og sykdomsutvikling (AP3).
  • Å studere den tidsmessige utviklingen av infeksjonen og den romlige distribusjonen av Ca. B. cysticola, samt vevslesjoner og immunresponser utløst av bakterien hos friske og kortisoninjiserte fisk (AP3).
  • Å undersøke sammenhengen mellom Ca. B. cysticola-mengde og vevslesjoner, samt studere vevsdistribusjon av bakterier, inflammatoriske celler og cytokin‑ekspresjon i gjellene hos atlantisk laks med naturlig forekommende infeksjon i ferskvanns- og sjøvannsfasen (AP4).
  • Å fastslå om karakteristika ved vevslesjoner og forekomst av bakterier og lesjoner i vevet sammenfaller og er konsistente på tvers av ulike populasjoner med Ca. B. cysticola-infeksjon (AP4).
  • Å studere immunresponsene som utløses i gjellevev under naturlige Ca. B. cysticola-infeksjoner hos settefisk og atlantisk laks i sjø (AP4).

Å forstå, forebygge og redusere gjellesykdom og de negative konsekvensene av svekket gjellehelse er av avgjørende betydning for akvakulturnæringen. Gjellesykdom regnes konsekvent som en av de viktigste helseutfordringene hos matfisk i sjø, og bidrar til store økonomiske tap gjennom dødelighet, redusert tilvekst, nedgradert produktkvalitet, økte driftskostnader og tidlig utslakting. Etter hvert som produksjonen intensiveres og utvides til nye systemer som semilukkede anlegg og landbaserte resirkuleringsanlegg (RAS), vil gjellehelse fortsatt være en sentral utfordring. Selv om nye produksjonssystemer kan redusere eksponering for enkelte patogener og miljøstressorer, kan gjellesykdom fortsatt være en viktig utfordring. Gjellesykdom kan også ramme fisk i settefiskanlegg. Ca. B. cysticola er et av de infeksiøse agensene som kan infisere fisk i ferskvann og sannsynligvis spres til oppdrettsfisk via kontaminert inntaksvann. Dette prosjektet vil gi ny kunnskap om betydningen av Ca. B. cysticola som gjellepatogen, informasjon som vil bidra til å avklare årsaker til utbrudd av gjellesykdom og dødelighet. Å undersøke om immunsuppresjon påvirker utviklingen av gjellesykdom og immunresponsen etter Ca. B. cysticola-infeksjon vil gi nyttig innsikt i mulige risikofaktorer for sykdom assosiert med bakterien. På lengre sikt kan prosjektet potensielt etablere en infeksjonsmodell som kan brukes til å utforske risikofaktorer som fører til Ca. B. cysticola-assosiert sykdom, studere ko‑infeksjoner og undersøke om utfallet av infeksjoner med andre gjellepatogener påvirkes av samtidig eller forutgående Ca. B. cysticola-infeksjon. En slik modell kan også brukes til å teste mulige tiltak for å forebygge eller redusere gjellesykdom, som spesialfôr eller probiotika.
Prosjektet er organisert i følgende arbeidspakker (AP-er):

AP 1: Isolering og dyrking av Ca. B. cysticola
Ansvarlig: Letemichael Negash Welekidan (NMBU Veterinærhøgskolen)

Aktivitetsbeskrivelse:
  • Settefisk vil screenes for ulike patogener å identifisere fiskegrupper og individer med monoinfeksjoner. Alternativt homogeniseres gjellevev fra fisk med færrest mulige koinfeksjoner og brukes til isolering. Gjellehomogenater renses gjennom trinnvis sentrifugering, filtrering og tetthetsgradienter for å separere ut Ca. B. cysticola bakterieceller. Kromatografi brukes videre for å berike levedyktige bakterier basert på cellenes overflateegenskaper.
  • Utvikling av metoder for dyrking av Ca. B. cysticola i renkultur: Isolerte Ca. B. cysticola vil forsøksvis dyrkes i gjelleepitel- og fibroblastcellelinjer fra atlantisk laks og ulike samkulturmetoder inkludert diffusjonsbaserte systemer. Bruk av «hjelper»-stammer samt dyrkning i ulike serum‑baserte og serumfrie medier vil forsøkes.
AP 2: Pilotforsøk
Ansvarlig: Henning Sørum (NMBU Veterinærhøgskolen)

Aktivitetsbeskrivelse:
  • Avhengig av resultatene fra AP 1, vil dyrkede bakterier, isolerte og berikede bakterier og/eller Ca. B. cysticola-infisert vev eller hele døde eller levende atlantisk laks brukes til å infisere naive atlantiske laks i et kontrollert laboratoriemiljø. Infeksjon vil forsøkes med ulike tilnærminger, inkludert badesmitte, direkte kontakt med gjellevev, eksponering for infisert vev og/eller fisk, og/eller kohabitantsmitte.
  • Prøver vil tas til histopatologisk undersøkelse, RT-qPCR og bakteriologi for å følge utviklingen av infeksjon over tid og beskrive eventuelle vevsforandringer som utvikles i gjellene.
AP 3: Smittemodell, patogenese og immunrepons
Ansvarlig: Liv Østevik (NMBU Veterinærhøgskolen)

Aktivitetsbeskrivelse:
  • Et større smitteforsøk vil bli gjennomført for å studere utviklingen av infeksjonen over tid, bakterienes distribusjon i gjellevevet, immunresponser og vevslesjoner etter infeksjon. Ideelt ønsker man å gjennomføre badesmitte med renkultur av Ca. B. cysticola, men infeksjonsdose og metode vil velges basert på resultatene i AP 1 og AP 2.
  • Hydrokortisoninjeksjon vil brukes for å indusere immunsuppresjon og fremprovosere sykdomsutvikling, slik at utfallet av infeksjon kan sammenlignes i immunkompetente og immunsupprimerte fisk.
  • Gjellevev vil tas jevnlig til histopatologisk undersøkelse, RT-qPCR, in situ-hybridisering, transmisjonselektronmikroskopi (TEM), bakteriologi og genekspresjonsanalyse, slik at både utviklingen av infeksjon, vertens immunrespons og vevsforandringer kan karakteriseres og resultatene fra ulike metoder kan tolkes i sammenheng.
AP 4: Ca. B. cysticola infeksjon, patologi og immunresponser i feltmateriale
Ansvarlig: Hege Lund (NMBU Veterinærhøgskolen)

Aktivitetsbeskrivelse:
  • Prosjektet har tilgang på gjellevev innsamlet i løpet av to tidligere prospektive kohort-studier som følger fiskegrupper fra ferskvann til sjøvann (FHF-901793 og FHF-901515), der det finnes data på infeksjonsstatus for Ca. B. cysticola og andre gjelleagens. Fra dette materialet vil det velges ut: a) En gruppe med fisk med lave Ct-nivåer med Ca. B. cysticola i ferskvannsfasen. b) Ulike grupper med fisk fra sjøfasen med lav Ct for Ca. B. cysticola, som vil matches med fisk med ingen eller lav bakteriell belastning.
  • Histopatologisk undersøkelse, in situ-hybridisering og genekspresjonsanalyse vil gjennomføres for å studere vevslesjoner, immunrespons og sammenhengen mellom disse i fisk med naturlig forekommende Ca. B. cysticola infeksjon og hos fisk med koinfeksjoner med andre gjelleagens.

En prosjekt­nettside driftet av NMBU vil bli etablert for å dele relevant informasjon og resultater fra prosjektet. Muntlige presentasjoner av interessante funn vil bli holdt på relevante seminarer og konferanser nasjonalt og internasjonalt. Artikler i populærvitenskapelige medier vil sikre at oppdrettere og ansatte i akvakulturnæringen blir informert om hovedfunnene i studien, mens vitenskapelige artikler vil formidle resultater til forskningsmiljøet. Resultatene vil også bli presentert for næringen gjennom to webinarer åpne for alle interesserte, ett etter to år og ett ved prosjektets slutt. Prosjektmedlemmer vil delta i en podkast for å formidle hovedresultatene til industrien. I tillegg vil vitenskapelige artikler bli publisert som angitt under hver arbeidspakke.

Konkret er målsetningen å levere publikasjoner som følger:

AP 1: (i) en vitenskapelig publikasjon som beskriver dyrkingskravene til Ca. B. cysticola, og (ii) utviklingen av en detaljert laboratorieprotokoll for isolering og dyrking av organismen på ulike kulturmedier.

AP 2: Avhengig av hvilke resultater som oppnås, vil disse enten inngå i en publikasjon som beskriver resultatene fra AP 3, eller publiseres som en egen artikkel som beskriver den temporal utvikling av infeksjon og patologiske forandringer i gjellene ved ulike metoder for å etablere eksperimentell Ca. B. cysticola-infeksjon hos atlantisk laks.

AP 3: (i) publisering av en vitenskapelig artikkel som beskriver vevslesjoner og immunresponser etter Ca. B. cysticola-infeksjon hos naive immunkompetente og immunsupprimerte fisk; og (ii) publisering av en populærvitenskapelig artikkel som oppsummerer hovedfunnene fra studien.

AP 4: (i) publisering av en vitenskapelig artikkel som beskriver vevslesjoner og immunresponser hos atlantisk laks i ferskvann og sjø med naturlig Ca. B. cysticola-infeksjon; og (ii) publisering av en populærvitenskapelig artikkel som oppsummerer hovedfunnene fra studien.